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熒光PCR凍干之PVP 2020-07-25

聚乙烯吡咯烷酮簡稱PVP,是一種非離子型高分子化合物，是N-乙烯基酰胺類聚合物中被研究得深、廣泛的精細化學品品種。應用于醫藥、化妝品、食品等行業。可做粘合劑、增溶劑、分散或共研磨劑、活性成分穩定劑等。PVP按其平均分子量大小分為四級，用K值表示，K值實際上是與PVP水溶液的相對粘度有關的特征值，而粘度又是與高聚物分子量有關的物理量，一般K值越大，其粘度越大，粘接性越強。熒光PCR凍干時，PVP能夠增強PCR產物生成量，其中PVP也能有效提高PCR效率和特異性。PVP作為PCR... 查看更多
熒光PCR凍干保護劑之蔗糖 2020-07-24

蔗糖是由葡萄糖和果糖通過異構體羥基縮合而成的非還原性二糖。蔗糖極易溶于水其溶解度隨著溫度的升高而增大。蔗糖的化學性質穩定，多呈無定型結構，對阻止蛋白質二級結構改變、凍干處理過程中，貯藏期內蛋白質的伸展和聚集起重要的作用。糖對蛋白質保護作用大小有時和其濃度有關，通常在某個濃度范圍內糖的保護作用隨著濃度的升高而增大；當達到某一濃度時保護作用達到大值，而此后再增大糖的濃度則保護效果不再顯著增加，有時反而會降低。在凍干時，其中蔗糖海藻糖等雙糖對一些蛋白質均能顯示出良好的保護作用，具備... 查看更多
熒光PCR凍干保護劑之海藻糖 2020-07-23

海藻糖又稱漏蘆糖、蕈糖等，是一種通過生物發酵技術從玉米、木薯等淀粉獲得的安全、可靠的天然糖類。海藻糖在食品以及醫藥生物制品方面等廣泛應用。海藻糖是怎么應用的呢？在食品中作為添加劑來改善干燥食品的質量和風味。在醫藥生物制品方面海藻糖因其具有高玻璃化轉變溫度和低吸濕性等特性，對實現蛋白等生物藥品的玻璃化凍結起重要作用，既是有效的低溫保護劑又是很好的凍干保護劑。海藻糖作為熒光PCR凍干保護劑的其中一種，在凍干中的應用：既能在冷凍過程中充當低溫保護劑，又能在干燥脫水過程中起到脫水保護... 查看更多
熒光定量PCR的優點 2020-07-21

普及一下熒光定量PCR的幾個優點：1、使用特異性探針對定量分子進行識別，具有很高的準確性。同時靶序列由引物和探針雙重控制，特異性好、假陽性低。2、熒光PCR檢測技術是綜合了PCR技術、熒光標記技術、激光技術、數碼顯象技術為一體的技術，因此檢測靈敏度高。3、熒光信號的產生和每次擴增產物成一一對應的關系，通過熒光信號的檢測可以直接對產物進行定量；定量范圍可在0－1010拷貝/毫升。4、擴增和檢測可以在同一管內檢測，一步完成，不需要開蓋，不易污染。5、速度快、高通量，可在2－3小時... 查看更多
熒光PCR凍干保護劑-叔丁醇 2020-07-19

叔丁醇被大家認為是適合制劑的凍干溶劑。有如下特點：凝固點高，純的叔丁醇在室溫下（25℃）就可以凍結。叔丁醇的蒸汽壓較高有利于升華，節省凍干時間。叔丁醇毒性低，在凍干過程中，大部分叔丁醇可在一次干燥階段升華，在制劑中殘留量很低。叔丁醇自身在凍結中形成針狀結晶，能改變溶質的結晶方式，利于升華。叔丁醇也可在熒光PCR試劑當凍干保護劑使用。叔丁醇起到加快凍干進程和改善凍干微觀結構的作用。凍干前的熒光PCR反應混合物原液中的濃度范圍為：叔丁醇的濃度為10%-40%（v/v）。熒光PCR... 查看更多
熒光PCR凍干保護劑篩選方法 2020-07-19

熒光PCR凍干體系篩選范圍:糖類、醇類、氨基酸類、聚合物類、大分子蛋白、無機鹽類等，其組分為其中的幾種的組合。優化方法：沒有經驗采用單一因素法，有一定經驗的采用多因素法。單一因素法篩選出保護效果比較好的保護劑，再將保護效果好的保護劑進行組合，產生終配方。因此，初步篩選采用單因素法，進一步篩選采用多因素法。我們不但能提供適合熒光PCR凍干的試劑凍干機Pilot10-15T，還能為用戶提供對藥品、診斷試劑、蛋白、多肽、酶、抗體、抗原等進行凍干工藝優化，包括保護劑優化、凍干曲線優化... 查看更多
熒光定量PCR實驗時的好方法 2020-07-18

實時熒光定量PCR技術實現了PCR從定性到定量的飛躍，具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，成為核酸分子定量的標準方法。在做熒光定量PCR實驗時建議使用這些耗材：96孔光學反應板配合光學膜，0.2ml光學八聯反應管配合光學膜，0.2ml光學八聯反應管配合平蓋的光學八聯管蓋等。在做熒光定量PCR實驗時有一些好的方法分享給大家，例如在使用單管或者8連管做實驗時，如果在樣本數量不多的時候，建議在樣品加熱塊（TRAY）上對稱的安放樣品，并且先放在第6列或者第7列... 查看更多
實時定量PCR之定量 2020-07-17

實時定量PCR不僅操作簡便、快速高效，而且具有很高的敏感性和特異性。廣泛地運用于分子生物學的各個領域。實時定量PCR在應用中有一些使用人對定量的方法上覺得存在著不容易克服的問題主要包括1.定量的方法與眾多因素有關，如水、緩沖液、儀器性能等，乃至于核酸的抽提過程都會影響到結果的穩定性。2.標準品的穩定保存很難獲得成功，高濃度的核酸物質易于被降解，而每次配制新的標準品又會增加批間差異。3.每次測定樣本都要同時測定標準品，而熱循環儀的樣本孔有限，所以在單批內不能測定更多的樣本，這樣... 查看更多

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